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中国药典2005版收载品种：脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸 （猴肾细胞）
名称:
脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸 （猴肾细胞）
汉语拼音:
JisuihUizhiyan Jiandu Huoyimiao TangWan（Houshen Xibao）
英文名:
Poliomyelitis Vaccine in Dragee Candy（Monkey Kidney Cell），Live
药物组成:
本品系用脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型减毒株分别接种于原代猴肾细胞，经培养、收获病毒液后制成糖丸。
用途:
用于预防脊髓灰质炎。
中西药分类:
生物制品（预防类）
生物制品制备:
1 基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。
2制造
2.1生产用细胞
生产用细胞为原代猴肾细胞。
2.1.1细胞管理及检定
应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
生产用猴肾细胞应选自未做过其他试验的健康猕猴，所用动物必须经不少于6周的隔离检疫，应无结核、B病毒感染及其他急性传染病，
血清中泡沫病毒抗体应为阴性。凡有严重化脓灶、赘生物以及明显的肝、肾病理改变着不得使用。
2.1.2细胞制备
取符合2.1.1项要求的健康猕猴肾脏，经胰蛋白酶消化、分散细胞，置37.0℃土0.5℃培养6-9天长成单层。每只猕猴制备的细胞为一个
细胞批。
2.2毒种
2.2.1名称及来源
生产用毒种为脊髓灰质炎病毒Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ型减毒株；可用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin纯化株，中m2株或经批准的其他毒株。
2.2.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
2.2.2.1原始种子批
Sabin株原始毒种Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型及中Ⅲ2。株均由毒种研制单位制备和保存。
2.2.2.2主种子批
由原始毒种在胎猴肾细胞或人二倍体细胞上传1-2代制成的成分均一的一批病毒悬液称为主种子批。
Sabin株主种子批的传代水平为SO＋1；中Ⅲ2。株主种子批传代水平为中Ⅲ2 1代；Ⅲ型pfizer株主种子批为RSO 1。
2.2.2.3作种子批
主种于批毒种在胎猴肾细胞或人二倍体细胞上传1代制备成的成分均一的一批病毒悬液称为工作种子批。
2.2.3毒种传代
从原始种子批到工作种子批的传代次数，SabninⅠ型、Sabin Ⅱ型和其他纯化株以及中Ⅲ2。株不得超过3代；SabinⅢ型及其他纯化株
包括pfizer株不得超过2代。
制备生产用种子批所用的细胞应限于胎猴肾细胞或人二倍体细胞。
2.2.4种子批毒种的检定
除另有规定外，主种子批及工作种子批应进行以下全面检定。
2.2.4.1鉴别试验
取适量Ⅰ型、Ⅱ型或Ⅲ型单价脊髓灰质炎病毒抗血清与适量病毒液混合，置35-37℃中和12小时，接种猴肾细胞、HeP-2细胞或其他敏感
细胞，置适宜温度（35-36℃）培养，7天判定结果，病毒型别应准确无误。同时设血清和细胞对照，均应为阴性。病毒对照应为阳性。
2.2.4.2病毒液定
采用微量细胞病变法。取毒种做10倍系列稀释，每稀释庭病毒液接种猴肾细胞、Hep-2细胞或其他敏感细胞，置适宜温度（35-36℃）
培养，7天判定结果。病毒滴度均应不低于6.5 lg CCID50/ml。应同时进行病毒参考品滴定。
2.2.4.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
2.2.4支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
2.2.4.5病毒外源因子检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。
2.2.4.6家兔检查
毒种应进行此项检查，如不立即进行试验，毒种应保存于-20℃以下。取体重为1.5-2.5kg的健康家兔至少5只，每只注射10ml，
用其中1.0ml皮内多处注射，其余皮下注射，观察3周。到期存活动物数应不低于80%，无B病毒和其他病毒感染判为合格。家兔在24小时
以后死亡，疑有B病毒感染者应尸检，须留神经组织和脏器标本待查，用脑组织做10%悬液，用同样方法接种5只健康家兔进行检查。
2.2.4.7免疫原性检查
用主种子批毒种制成原疫苗，按常规接种易感儿童（免疫前抗体效价＜1:4）至少3O名，分别于免疫前及免疫后4周采血，测定中和
抗体，免疫后抗体阳转率应不低于95%。
2.2.4.8猴体神经毒力试验
依法检查（附录Ⅺ L），应符合规定。
2.2.4.9rot特征试验
将单价病毒液分别于36℃±0.1℃及40℃±0.1℃进行病毒滴定，试验设t-对照（生产毒种或已知对人安全的疫苗）。如果病毒液和卜对
照在36℃±0.1℃的病毒滴度与40℃±0.1℃的滴度差不低于50lg，则rot特征试验合格。
2.2.4.10 SV40 核酸序列检查
依法检查（附录Ⅸ H），应为阴性。
2.2.5毒种保存
液体毒种需加终浓度为1mol/L。的氯化镁溶液，置-60℃以下保存。
2.3原液
2.3.1细胞制备
同2.1.2项。
2.3.2培养液
培养液为含适量灭能小牛血清和乳蛋白水解物的Fnrfe’S液或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求（附录Ⅻ D）。培养病毒的维持液为不含小牛血清和乳蛋白水解物的Earfe’s液或其他适宜的维持液。
2.3.3对照细胞病毒外源因子检查
依法检查（附录Ⅻ C），应符合规定。
2.3.4病毒接种和培养
毒种与细胞按一定比例接种，种毒后置33℃±0.5℃培养40-96小时至细胞出现完全病变后收获。
2.3.5病毒收获
病毒液经澄清过滤合并后即为单价原液。
2.3.6原液合并或浓缩
单价原液可进行合并或浓缩。
2.3.7单价原液检定
按3.1项进行。
2.4半成品
2.4.1配制
单价病毒原液加入氯化镁，终浓度为1mol/L，即为单价疫苗半成品。取适量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价疫苗半成品，按一定比例进行配制，即为三价疫苗半成品。
2.4.2半成品检定
按3.2项进行。
2.5成品
2.5.1疫苗糖丸制备
三价疫苗半成品及赋形剂按一定比例混合制成糖丸。滚制糖丸时，操作室内温度应在18℃以下。
2.5.2分批
应符合“生物制品分批规程”规定。同一次混合的三价疫苗半成品制备的糖丸为一批，非同容器滚制的糖丸分为不同亚批。
2.5.3分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.5.4规格
每粒1g。每1次人用剂量为1粒，含脊髓灰质炎活病毒总量应不低于5.95 lgCCUD50，其中Ⅰ型应不低于5.8 lg CCID50，Ⅱ型应不低于4.8 lg CCID50，Ⅲ型应不低于5.3 lg CCID50。
2.5.5包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1原液检定
3.1.1鉴别试验
按2.2.4.1项进行
3.1.2病毒滴定
按2.2.4.2 项进行。病毒滴度均应不低于6.5 lg CCID50/ml。
3.1.3猴体神经毒力试验
依法检查（附录对Ⅺ L），应符合规定。
3.1.4 SV40 核酸序列检查
依法检查（附录Ⅸ H），结果应为阴性。
3.1.5无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.1.6支原体检查
依法检查（附录Ⅻ B），应符合规定。
3.2半成品检定
3.2.1病毒滴定
按2.2.4.2项进行。单价疫苗半成品病毒滴度应不低于6.5 lg CCID50/ml。三价疫苗半成品病毒滴度应不低于7.15 lg CCID50/ml，其中1型应不低于7.0 lg CCID50/ml，Ⅱ型应不低于60 lg CCID50/ml，Ⅲ型应不低于6.5lg CCID50/ml。
3.2.2无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3成品检定
每个糖丸滚制容器取200-300粒。
3.3.1鉴别试验
取适量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三价混合脊髓灰质炎病毒抗血清与适量病毒供试品混合，置35-37℃中和1-2小时，接种HeP-2细胞或其他敏感细胞，置适宜温度（3-36℃）培养，7天判定结果，应无病变出现。同时设血清和细胞对照，均应为阴性。病毒对照应为阳性。
3.3.2外观
应为白色固体糖丸。
3.3.3九重差异
取糖丸20粒测定，每1粒重量为1g±0.15g。
3.3.4病毒滴定
每3-4亚批合并为1个检定批，取100粒糖丸，加Earle’s液至1000ml，即为 l:10稀释度，取适宜的稀释度用病变法进行病毒液定。
三价疫苗糖丸以混合法测定病毒含量，同时应以中和法检测各型病毒含量。采用中和法需预先精确测定异型抗体的交叉抑制值，以校正滴定结果。按2.2.4.2项测定病毒滴度，每剂三价疫苗糖丸病毒总量应不低于5.95lg CCID50，其中Ⅰ型应不低于 5.8 lg CCID50，Ⅱ型应不低于4.8 lg CCID50，Ⅲ型应不低于5.3 lg CCID50。
3.3.5热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验，应与病毒滴定同时进行。37℃放置48小时后，按2.2.4.2项进行病毒滴定，病毒滴度应不低于5.0 lg CCID50，病毒滴度下降应不高于1.0 lg。
3.3.6病毒分布均匀度
每批抽查糖丸10粒以上，测定疫苗糖丸的病毒分布均匀度。逐粒滴定病毒含量，各粒之间的病毒含量差不得超过0.5lg。
3.3.7杂菌数检查
同一天滚制的糖丸为1个供试品，每个糖丸滚制容器中取样不得少于10粒，每粒杂菌数不得超过300个。
3.3.8致病菌检查
不得含有乙型溶血性链球菌、肠道致病菌以及大肠杆菌。
3.3.8.1乙型溶血性链球菌检查
取10倍稀释的本品0.5ml，接种肉场培养基1支，37℃培养24小时，再用划线法移种血平皿1个，37℃培养24小时，应无乙型溶血性链球菌生长（如原料、辅料已做过此项检查并合格，成品可不再做）。
3.3.8.2肠道致病菌检查
取10倍稀释的本品1.0ml，接种GN或肉汤增菌培养基1管，37℃培养，于6-24小时内用划线法转种鉴别培养基干皿1个，37℃培养24小时，如有革兰阴性杆菌，应进一步鉴定是否为肠道致病菌。
3.3.8.3大肠杆菌检查
取经10倍稀释的本品接种普通克斯列或麦康凯肉汤培养基3管，每管2ml，37℃培养48小时，不应有产酸、产气现象。如有产酸、产气现象，应进一步鉴别是否为大肠杆菌。
4保存、运输及有效期
自病毒滴度检定合格之日起，于-20℃以下保存，有效期为2年；干2-8℃保存，有效期为5个月。运输应在冷藏条件下进行。标签上只能规定一种保存温度及有效期。
5使用说明
脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸（猴肾细胞）使用说明
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